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牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)属于黄病毒科瘟病毒属，是球状的单股正链RNA病毒，基因组全长约12.5 kbp。牛病毒性腹泻病毒感染后可引起多种不同的临床症状，包括腹泻、流产、免疫抑制等，给牛养殖业造成了严重的经济损失。
因此，快速检测牛病毒性腹泻病毒具有重要的意义。

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
   
2. 产品经过精心优化，分析灵敏度可达达100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据牛病毒性腹泻病毒RNA高度保守区设计，分析发现它能检测牛病毒性腹泻病毒，不会跟除此之外的其他生物的RNA发生交叉反应。
   
5. 本制品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
   
6. 本制品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
   
7. 本制品只能用于科研。

1. 引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
   
2. 为避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(10⁴拷贝/μL，本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
   
2. 用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

3. 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
   

   成分	N+2个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
   2×RT-PCR Buffer	各10μL	10μL	10μL
   10×RT-PCR酶混合液	1μL	1μL	1μL
   牛病毒性腹泻病毒RT-PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
   制备的N+2个RNA样品	各7μL	不加	不加
   超纯水	不加	7μL	不加
   牛病毒性腹泻病毒RT-PCR阳性对照(104拷贝/μL)	不加	不加	7μL

4. 按下表参数进行RT-PCR反应：
   

   过程	温度	时间
   逆转录	42℃	55min
   预变性	95℃	5min
   PCR反应 (30个循环)	95℃	15sec
   	55℃	60sec
   	65℃	60sec
   延伸	72℃	10min

5. 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
   
6. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为110bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。